elisa試劑盒間接法測抗體的操作步驟
2021-06-21
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elisa試劑盒,ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
elisa試劑盒在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。
elisa試劑盒間接法測抗體:間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(二抗)以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:
1.將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原,洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
2.加稀釋的樣本,保溫反應(yīng)。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
3.加酶標抗抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標抗抗體結(jié)合,從而間接地標記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。
4.加底物顯色。